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      ARTICLE/ 技術文章
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      Precellys:研磨蜱蟲提取可培養的活體細菌

      發布時間:2021-03-04瀏覽:83次

      疾病從老鼠傳播到人體通常通過與老鼠排泄物直接接觸、在受污染的環境或者通過體外寄生蟲例如蜱蟲(硬蜱屬Ixodes sp)等方式。尤其在野生老鼠中會通常遇到三宿主蜱蟲,它們已經被證明了攜帶紅孢子蟲屬Anaplasma sp和巴貝西蟲屬Babesia sp兩種病原體。這些病原體通常在環境中可以找到,例如芽孢桿菌和類芽孢桿菌都是普遍存在的,近一些稀有的病原體在臨床實驗中也被發現,它們會引起一些人類傳染病。

       

      人類居住地通過人類活動產生的廢棄物通常會吸引野生嚙齒動物,這有助于蜱蟲病原體的傳播。

      正因為如此,一些研究機構開始從野生嚙齒動物收集蜱蟲,研究蜱蟲體外可培養的活體細菌。

       

      實驗材料與實驗方案

      捕獲嚙齒動物(馬來西亞雪蘭莪州森林),并鑒定種類如表1所示。

      收集捕獲嚙齒動物體外的蜱蟲。從形態學上鑒定老鼠體外收集的飽滿的成年蜱蟲。

       

      研磨之前使用70%的乙醇以及去核酸酶的水對收集的蜱蟲單獨進行清洗消毒,確保清除環境中的污染物。

       

      清洗過的蜱蟲放在Precellys24中研磨,研磨管選擇Precellys® Lysing kit CK28, ref. P000911-LYSK0-A.0(2.8mm陶瓷珠),研磨管中加500ulPBS,研磨程序為轉速5500rpm,研磨時間40s。

       

      研磨之后的蜱蟲接種到含有5%綿羊血的哥倫比亞瓊脂培養基上,在37℃有氧的條件下培養48小時。

       

      細菌培養純化獲得單個的克隆,通過16S rDNA測序來鑒定。

       

      實驗結果

      通過16S rDNA,ctpA測序和生物化學檢測,在老鼠(Sundamys muelleri大巽他鼠屬)如圖1中A所示中收集飽滿的成年雌性蜱蟲如圖1B和C所示鑒別出一種獨一/無二的細菌分離物Paenibacillus lautus,屬于類芽孢桿菌的一種。

       

      P. lautus分離物對阿米卡星,環丙沙星,亞胺培南和美羅培南十分敏感,同時對氨芐青霉素、青霉素、克林霉素、氯霉素、利福平、三甲氧芐磺胺甲惡唑以及紅霉素和慶大霉素有一定抗性。

       

      實驗結論

      Precellys 24結合正確的研磨管和研磨條件可以從蜱蟲或感染的組織樣品中提取可培養的細菌,確保在研磨之后可繼續培養。

       

      人體被蜱蟲咬過之后,蜱蟲體外攜帶的P. lautus細菌可能會引起疾病。為了減少野生嚙齒動物對人類居住地的影響,在公共娛樂場所應有組織監督廢物的處理。

       

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